ප්රතිදීප්ත අන්වීක්ෂයේ ප්රතිදීප්ත පෙරහන අත්‍යවශ්‍ය අංගයකි. සාමාන්‍ය පද්ධතියකට මූලික පෙරහන් තුනක් ඇත: උද්දීපන පෙරහන, විමෝචන පෙරහන සහ ඩයික්‍රොයික් දර්පණය. ඒවා සාමාන්‍යයෙන් ඝනකයක් තුළ ඇසුරුම් කර ඇති අතර එමඟින් සමූහය අන්වීක්ෂයට ඇතුළු කරනු ලැබේ.
ප්රතිදීප්ත පෙරහන ක්‍රියා කරන්නේ කෙසේද?
උද්දීපන පෙරහන
උද්දීපන පෙරහන් නිශ්චිත තරංග ආයාමයක ආලෝකය සම්ප්‍රේෂණය කරන අතර අනෙකුත් තරංග ආයාම අවහිර කරයි. එක් වර්ණයක් පමණක් හරහා යාමට පෙරහන සුසර කිරීමෙන් විවිධ වර්ණ නිපදවීමට ඒවා භාවිතා කළ හැකිය. උද්දීපන පෙරහන් ප්‍රධාන වර්ග දෙකකින් පැමිණේ - දිගු පාස් පෙරහන් සහ බෑන්ඩ් පාස් පෙරහන්. එක්සයිටරය සාමාන්‍යයෙන් බෑන්ඩ්පාස් ෆිල්ටරයක් වන අතර එය ෆ්ලෝරෝෆෝරයෙන් අවශෝෂණය කරන තරංග ආයාමයන් පමණක් පසුකර යන අතර එමඟින් අනෙකුත් ප්රතිදීප්ත ප්‍රභවයන්ගේ උද්දීපනය අවම කර ප්රතිදීප්ත විමෝචන කලාපයේ උද්දීපන ආලෝකය අවහිර කරයි. රූපයේ නිල් රේඛාවෙන් දැක්වෙන පරිදි, BP 460-495 වේ, එයින් අදහස් වන්නේ එය 460-495nm ප්‍රතිදීප්තතාව හරහා පමණක් ගමන් කළ හැකි බවයි.
එය ප්රතිදීප්ත අන්වීක්ෂයක ආලෝකකරණ මාර්ගය තුළ තබා ඇති අතර ෆ්ලෝරෝෆෝර් උද්දීපන පරාසය හැර ආලෝක ප්‍රභවයේ සියලුම තරංග ආයාම පෙරහන් කරයි. පෙරහන අවම සම්ප්‍රේෂණය රූපවල දීප්තිය සහ දීප්තිය නියම කරයි. ඕනෑම උත්තේජක පෙරහනක් සඳහා අවම වශයෙන් 40% සම්ප්රේෂණයක් නිර්දේශ කෙරේ, එනම් සම්ප්‍රේෂණය ඉතා මැනවින් >85% වේ. උද්දීපන ෆිල්ටරයේ කලාප පළල සම්පූර්ණයෙන්ම ෆ්ලෝරෝෆෝර් උද්දීපන පරාසය තුළ තිබිය යුතුය, එනම් පෙරනයේ මධ්‍ය තරංග ආයාමය (සීඩබ්ලිව්එල්) ෆ්ලෝරෝෆෝරයේ උච්ච උද්දීපන තරංග ආයාමයට හැකි තරම් සමීප වේ. උද්දීපන පෙරහන දෘශ්‍ය ඝනත්වය (OD) පසුබිම් රූපයේ අන්ධකාරය නියම කරයි; OD යනු සම්ප්‍රේෂණ පරාසයෙන් හෝ කලාප පළලෙන් පිටත තරංග ආයාම පෙරහනක් කෙතරම් හොඳින් අවහිර කරයිද යන්න මැන බැලීමකි. අවම OD 3.0 නිර්දේශිත නමුත් 6.0 හෝ ඊට වැඩි OD සුදුසු වේ.
විමෝචන පෙරහන
විමෝචන පෙරහන් මඟින් නියැදියෙන් අවශ්‍ය ප්‍රතිදීප්තතාව අනාවරකයට ළඟා වීමට ඉඩ සැලසීමේ අරමුණ ඉටු කරයි. ඔවුන් කෙටි තරංග ආයාම අවහිර කරන අතර දිගු තරංග ආයාම සඳහා ඉහළ සම්ප්රේෂණයක් ඇත. පෙරහන් වර්ගය ද අංකයක් සමඟ සම්බන්ධ වේ, උදාහරණයක් ලෙස රූපයේ BA510IF (මැදිහත්වීම් බාධක පෙරහන), එම තනතුර එහි උපරිම සම්ප්‍රේෂණයෙන් 50% තරංග ආයාමයට යොමු කරයි.
උත්තේජක පෙරහන් සඳහා වන එම නිර්දේශයන් විමෝචන පෙරහන් සඳහා සත්‍ය වේ: අවම සම්ප්‍රේෂණය, කලාප පළල, OD, සහ CWL. පරමාදර්ශී CWL, අවම සම්ප්‍රේෂණය සහ OD සංයෝජනය සහිත විමෝචන පෙරහනක් හැකි තරම් ගැඹුරුම අවහිර කිරීම් සහිතව දීප්තිමත්ම රූප සපයන අතර දුර්වලම විමෝචන සංඥා හඳුනාගැනීම සහතික කරයි.
Dichroic මිරර්
ඩයික්‍රොයික් දර්පණය උද්දීපන පෙරහන සහ විමෝචන පෙරහන අතර 45 ° කෝණයක තබා ඇති අතර විමෝචන සංඥාව අනාවරකය දෙසට සම්ප්‍රේෂණය කරන අතරතුර fluorophore දෙසට උද්දීපන සංඥාව පරාවර්තනය කරයි. Ideal dichroic filters සහ beam splitters උපරිම පරාවර්තනය සහ උපරිම සම්ප්‍රේෂණය අතර තියුණු සංක්‍රාන්ති ඇති අතර, උත්තේජක පෙරනයේ කලාප පළල සඳහා > 95% පරාවර්තනයක් සහ විමෝචන පෙරහනේ කලාප පළල සඳහා > 90% සම්ප්රේෂණයක් ඇත. අයාලේ යන ආලෝකය අවම කිරීමට සහ ප්රතිදීප්ත රූප සංඥා-ශබ්ද අනුපාතය උපරිම කිරීමට, ෆ්ලෝරෝෆෝරයේ ඡේදනය වන තරංග ආයාමය (λ) මනසේ තබාගෙන පෙරහන තෝරන්න.
මෙම රූපයේ ඇති ඩයික්‍රොයික් දර්පණය DM505 වේ, නැනෝමීටර 505 මෙම දර්පණය සඳහා උපරිම සම්ප්‍රේෂණයෙන් 50% තරංග ආයාමය වන බැවින් එසේ නම් කර ඇත. මෙම දර්පණය සඳහා සම්ප්‍රේෂණ වක්‍රය 505 nm ට වඩා ඉහළ සම්ප්රේෂණයක් පෙන්නුම් කරයි, නැනෝමීටර 505 කින් වමට සම්ප්‍රේෂණයේ දැඩි පහත වැටීමක් සහ නැනෝමීටර 505 කින් වමට උපරිම පරාවර්තනය නමුත් තවමත් 505 nm ට අඩු සම්ප්රේෂණයක් තිබිය හැකිය.
දිගු පාස් සහ බෑන්ඩ් පාස් පෙරහන් අතර වෙනස කුමක්ද?
ප්රතිදීප්ත ෆිල්ටර වර්ග දෙකකට බෙදිය හැකිය: දිගු පාස් (LP) සහ බෑන්ඩ් පාස් (BP).
දිගු ගමන් පෙරහන් දිගු තරංග ආයාම සම්ප්‍රේෂණය කරන අතර කෙටි ඒවා අවහිර කරයි. කැපුම් තරංග ආයාමය උපරිම සම්ප්‍රේෂණයෙන් 50% ක අගය වන අතර, කපාට ඉහළින් ඇති සියලුම තරංග ආයාම දිගු ගමන් පෙරහන් මඟින් සම්ප්‍රේෂණය වේ. ඒවා ඩයික්‍රොයික් දර්පණ සහ විමෝචන පෙරහන් වල නිතර භාවිතා වේ. යෙදුමට උපරිම විමෝචන එකතු කිරීමක් අවශ්‍ය වූ විට සහ වර්ණාවලි වෙනස්කම් කිරීම යෝග්‍ය හෝ අවශ්‍ය නොවන විට Longpass ෆිල්ටර භාවිතා කළ යුතුය, එය සාමාන්‍යයෙන් සාපේක්ෂ වශයෙන් අඩු පසුබිම් ස්වයං ප්‍රතිදීප්තයක් සහිත නිදර්ශකවල තනි විමෝචන විශේෂයක් ජනනය කරන පරීක්ෂණ සඳහා සිදු වේ.
බෑන්ඩ් පාස් ෆිල්ටර් යම් තරංග ආයාම කලාපයක් පමණක් සම්ප්‍රේෂණය කරන අතර අනෙක් ඒවා අවහිර කරයි. ෆ්ලෝරෝෆෝර් විමෝචන වර්ණාවලියේ ප්‍රබලම කොටස පමණක් සම්ප්‍රේෂණය කිරීමට ඉඩ දීමෙන් ඒවා ක්‍රොස්ටෝක් අඩු කරයි, ස්වයංක්‍රීය ප්රතිදීප්ත ශබ්දය අඩු කරයි, එමඟින් දිගු ගමන් පෙරහන් ඉදිරිපත් කළ නොහැකි ඉහළ පසුබිම් ස්වයං ප්රතිදීප්ත සාම්පලවල සංඥා-ට-ශබ්ද අනුපාතය වැඩි දියුණු කරයි.
BestScope හට කොපමණ ප්රතිදීප්ත පෙරහන් කට්ටල සැපයිය හැකිද?
සමහර පොදු පෙරහන් වර්ග නිල්, කොළ සහ පාරජම්බුල පෙරහන් ඇතුළත් වේ. වගුවේ පෙන්වා ඇති පරිදි.
| පෙරහන් කට්ටලය | උද්දීපන පෙරහන | Dichroic මිරර් | බාධක පෙරහන | LED ලාම්පු තරංග දිග | යෙදුම |
| B | BP460-495 | DM505 | BA510 | 485nm | ·FITC: ප්රතිදීප්ත ප්රතිදේහ ක්රමය ·ඇසිඩින් තැඹිලි: DNA, RNA ·Auramine: Tubercle bacillus ·EGFP, S657, RSGFP |
| G | BP510-550 | DM570 | BA575 | 535nm | ·Rhodamine, TRITC: ප්රතිදීප්ත ප්රතිදේහ ක්රමය ප්‍රොපිඩියම් අයඩයිඩ්: DNA ·RFP |
| U | BP330-385 | DM410 | BA420 | 365nm | · ස්වයංක්‍රීය ප්රතිදීප්ත නිරීක්ෂණ DAPI: DNA පැල්ලම් ·Hoechest 332528, 33342: වර්ණදේහ පැල්ලම් සඳහා භාවිතා කරයි |
| V | BP400-410 | DM455 | BA460 | 405nm | · කැටෙකොලමයින් · 5-හයිඩ්‍රොක්සි ට්‍රිප්ටමින් ·Tetracycline: ඇටසැකිල්ල, දත් |
| R | BP620-650 | DM660 | BA670-750 | 640nm | · Cy5 ·Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 647 |
ප්රතිදීප්ත අත්පත් කර ගැනීම් වලදී භාවිතා වන පෙරහන් කට්ටල සැලසුම් කර ඇත්තේ ප්රතිදීප්ත යෙදුම්වල භාවිතා වන ප්‍රධාන තරංග ආයාමයන් වටා වන අතර එය වැඩිපුරම භාවිතා වන ෆ්ලෝරෝෆෝර වටා පදනම් වේ. මෙම හේතුව නිසා, ඒවා DAPI (නිල්), FITC (කොළ) හෝ TRITC (රතු) පෙරහන් කැට වැනි රූපකරණය සඳහා අදහස් කරන ෆ්ලෝරෝෆෝර් අනුව ද නම් කර ඇත.
| පෙරහන් කට්ටලය | උද්දීපන පෙරහන | Dichroic මිරර් | බාධක පෙරහන | LED ලාම්පු තරංග දිග |
| FITC | BP460-495 | DM505 | BA510-550 | 485nm |
| DAPI | BP360-390 | DM415 | BA435-485 | 365nm |
| TRITC | BP528-553 | DM565 | BA578-633 | 535nm |
| FL-Auramine | BP470 | DM480 | BA485 | 450nm |
| ටෙක්සාස් රතු | BP540-580 | DM595 | BA600-660 | 560nm |
| mCherry | BP542-582 | DM593 | BA605-675 | 560nm |
ඔබ ප්රතිදීප්ත පෙරහනක් තෝරා ගන්නේ කෙසේද?
1. ප්රතිදීප්ත පෙරහන තෝරාගැනීමේ මූලධර්මය නම්, ප්රතිදීප්ත/විමෝචන ආලෝකය හැකිතාක් දුරට ප්‍රතිබිම්බය හරහා ගමන් කිරීමට ඉඩ දීම සහ ඉහළම සංඥා-ශබ්ද අනුපාතය ලබා ගැනීම සඳහා එකවරම උද්දීපන ආලෝකය සම්පූර්ණයෙන්ම අවහිර කිරීමයි. විශේෂයෙන්ම බහු ෆොටෝන උද්දීපනය සහ සම්පූර්ණ අභ්‍යන්තර පරාවර්තන අන්වීක්ෂය යෙදීම සඳහා දුර්වල ඝෝෂාව ද රූප ආචරණයට විශාල බාධාවක් ඇති කරයි, එබැවින් සංඥා සහ ශබ්ද අනුපාතය සඳහා අවශ්‍යතාවය වැඩි වේ.
2. ෆ්ලෝරෝෆෝරයේ උද්දීපනය සහ විමෝචන වර්ණාවලිය දැන ගන්න. කළු පසුබිමක් සහිත උසස් තත්ත්වයේ, ඉහළ ප්‍රතිවිරුද්ධ රූපයක් ජනනය කරන ප්රතිදීප්ත පෙරහන් කට්ටලයක් තැනීමට, උද්දීපනය සහ විමෝචන පෙරහන් ෆ්ලෝරෝෆෝර් උද්දීපන උච්ච හෝ විමෝචනයට අනුරූප වන කලාප හරහා අවම පාස්බෑන්ඩ් රැල්ලක් සමඟ ඉහළ සම්ප්රේෂණයක් ලබා ගත යුතුය.
3. ප්රතිදීප්ත පෙරහන් වල කල්පැවැත්ම සලකා බලන්න. මෙම ෆිල්ටර "පිච්චීමට" තුඩු දිය හැකි පාරජම්බුල (UV) ආලෝකය ජනනය කරන තීව්‍ර ආලෝක ප්‍රභවවලට නොගැලපෙන විය යුතුය, විශේෂයෙන් උද්දීපනය කරන පෙරහන ආලෝකකරණ ප්‍රභවයේ සම්පූර්ණ තීව්‍රතාවයට යටත් වේ.
විවිධ ප්රතිදීප්ත නියැදි රූප
සම්පත් අන්තර්ජාලයේ එකතු කර සංවිධානය කර ඇති අතර ඒවා ඉගෙනීමට සහ සන්නිවේදනය සඳහා පමණක් භාවිතා වේ. කිසියම් උල්ලංඝනයක් තිබේ නම්, මකා දැමීමට කරුණාකර අප හා සම්බන්ධ වන්න.
පසු කාලය: දෙසැම්බර්-09-2022